机制研究
2019.08.19
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1、双荧光素酶报告基因实验:

 启动子与转录因子相互作用检测

 转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子,也称为反式作用因子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异顺序结合,这些特异性的序列被称为顺式因子。转录因子的DNA结合域和顺式因子实现相互结合,从而对基因的表达起抑制或增强的作用。荧光素酶报告基因实验是检测这类转录因子和其靶启动子中的特异顺序结合的重要手段。


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技术流程:




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应用领域:

潜在启动子/启动子核心区域检测;

潜在增强子/抑制子等调控子核心元件检测;

启动子区可能的转录因子结合位点检测;

启动子/增强子与转录因子的相互作用;

病毒/细胞相互作用;

药物等化学诱导因素对启动子活性的调节(抑制或增强);

射线等物理诱导因素对启动子活性的调节(抑制或增强)。

 

        miRNA与3’UTR相互作用检测

 

       可提供含有荧光素酶报告基因的人、大鼠、小鼠的3' UTR靶标克隆,利用荧光素酶报告系统体外验证miRNA潜在靶基因。miRNAs 与靶基因的3' UTR区域特异结合后调节靶基因的表达。当3' UTR靶标序列融合在一个荧光素酶报告基因下游并在体外表达时,miRNA通过与下游3' UTR特异结合从而调节荧光素酶的表达。最后,通过分析荧光素酶的活性,间接了解miRNA的靶标调控作用和特异性。


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2. protein -protein互作

Co-IP(Co-Immunoprecipitation)基于抗体和抗原之间结合的专一性用于研究蛋白质相互作用的经典方法,是研究两种蛋白在细胞内的相互作用方法。

基本原理是:细胞在非变性条件下裂解,胞内的蛋白通过抗体结合,以此为饵蛋白,免疫共沉淀调取与饵蛋白结合互作的靶标蛋白,洗脱得到蛋白产物,用于WB检测验证或MS(质谱)分析

技术原理:

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技术服务流程:

1.WB检测饵蛋白的本底表达量(抗体特异性及效价检测,以及本底饵蛋白的表达量测定)

2.细胞裂解,获取裂解液

3.免疫共沉淀结合互作蛋白

4.纯化获取结合蛋白

5.WB检测或 MS分析

服务优势:

1.可为客户定制服务,做融合表达(flag,tag,HA等),更加严谨验证与探索细胞内生理状态下的结合与互作,更具说服力

2.设定不同组别,包括Input组,目的组,阴性组,实验严谨可靠

3.提供可直接用于文章的标准结果图,以及实验原图结果

4.提供完善的实验报告,更利于文章的撰写和申请

适用研究:

1.细胞内转录因子与转录因子结合互作,形成复合物的调控模式

2.各种通路及代谢中,蛋白与蛋白的互作结合调控

客户提供:

1.IP级别抗体(>30ug)及目的蛋白信息

2.活细胞:3-4*10^7

3.新鲜组织:组织量>0.3-0.5g

4.产物WB检测的抗体(>5-10ug)

辉园苑提供:

1.所有实验结果图及原始图片

2.完整实验报告

3.可直接用于文章使用的处理结果图

3. DNA/RNA-protein互作

1)ChIP实验:

染色质免疫沉淀技术(Chromatin immunoprecipitation assay, ChIP):是一种研究体内转录因子与基因组DNA之间互作结合的方法。基本原理是活细胞状态下,通过多聚甲醛固定,形成蛋白-DNA复合物,运用超声(或酶解)方法对染色体随机剪切至一定长度范围,通过免疫共沉淀富集结合,纯化获取转录因子蛋白所结合的启动子区域片段,后续产物可用于Q-PCR检测验证或测序分析。

技术原理:

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技术服务流程:

1.细胞交联固定:多聚甲醛固定活细胞(或组织)

2.核质分离:提取细胞核,获取染色质

3.超声破碎:超声断裂染色质,获取一定范围长度的片段

4.免疫共沉淀:获取DNA与蛋白结合的特定复合物

5.解交联:解除DNA与蛋白的交联状态,纯化获取DNA产物

6.Q-PCR检测或建库测序

服务优势:

1.生物信息学方法,预测转录因子蛋白结合的启动子基因,以及预测结合的特定motif,为客户提供多选择信息

2.直接寻找转录因子结合的编码区上游靶基因,精准定位调控基因

3.设置完整组别,包括Input组,阳性组,对照组,阴性组,实验更加严谨可靠

4.提供可直接用于文章的标准结果图,以及实验原图结果

5.提供完善的实验报告,更利于文章的撰写和申请

适用研究:

1.适用于人,大鼠,小鼠等哺乳动物细胞的研究,探讨与验证体内转录因子蛋白调控启动子的关系

2.适用于临床各种组织样品的探讨研究,例:癌组织与癌旁组织,通过ChIP实验获取得到的样品产物DNA,建库测序获取调控的启动子基因

客户提供:

1.IP或ChIP级抗体,抗体量>20ug

2.活细胞:1-2*10^7

3.新鲜组织:组织量>0.1-0.3g

4.验证基因信息

辉园苑提供:

1.WB检测抗体效价与特异性结果图

2.染色体断裂图

3.完整实验报告

4.可直接用于文章使用的处理结果图


2)RIP

RIP(RNA Binding Protein Immunoprecipitation Assay,RNA结合蛋白免疫沉淀)实验技术是一种研究细胞内RNA与蛋白的结合互作实验技术,在表观上研究的是转录后的调控技术。基本原理是运用靶蛋白的抗体,将蛋白与结合的RNA复合物调取获得,后续纯化得到RNA,用于Q-PCR检测或高通量测序分析,验证预测结合的靶标RNA或探索结合调控的标志物RNA分子

技术原理:

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技术服务流程:

1.细胞裂解,获取裂解液

2.抗体与磁珠结合孵育,形成磁珠-抗体复合物

3.磁珠抗体复合物与裂解液孵育结合,捕获蛋白结合的RNA

4.纯化获取得到产物RNA

5.Q-PCR检测验证或高通量测序筛选靶标分子

服务优势:

1.生物信息学预测蛋白结合的序列,对蛋白结合互作的RNA分子进行检测和验证,可为客户提供深度研究,探讨RBP结合的RNA motif

2.设置完整组别,包括Input组,阳性组,对照组,阴性组,实验更加严谨可靠

3.提供可直接用于文章的标准结果图,以及实验原图结果

4.提供完善的实验报告,更利于文章的撰写和申请

适用研究:

1.适用于人,大鼠,小鼠等哺乳动物的研究,探讨与验证体内蛋白与RNA结合互作转录后调控研究

2.适用于各种RNA的研究,如:mRNA,LncRNA,miRNA,circle RNA等

3.适用于临床各种组织标本的探讨研究,例:癌组织与癌旁组织,通过RIP(AG02)实验获取得到的样品产物RNA,高通量测序,筛选靶标分子或分子标志物

客户提供:

1.IP或ChIP级抗体,抗体量>20ug

2.活细胞:8-9*10^7

3.新鲜组织:组织量>1-3g

4.验证基因信息

辉园苑提供:

1.WB检测抗体效价与特异性结果图

2.完整实验报告

3.可直接用于文章使用的处理结果图


3)RNA pull down 

RNA pull down 是一种研究RNA与蛋白结合互作的实验技术方法,生物体内许多功能的核心是RNA与蛋白的结合来进行调控,如:蛋白的合成,mRNA的组装,细胞发育调控等。基本原理是:通过体外转录获取标记的RNA作为探针,与细胞细胞裂解液孵育,免疫共沉淀的方法获取RNA结合捕获的蛋白,后续可通过WB检测验证结合蛋白,或通过质谱(MS)的方法得到结合蛋白的信息

技术原理:

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技术服务流程:

1.克隆载体的构建

2.体外转录形成标记的RNA探针

3.探针与裂解液孵育结合,形成磁珠-RNA-蛋白复合物

4.纯化获取蛋白产物

5.WB检测或MS分析

服务优势:

1.生物信息学预测,分析RNA motif与蛋白的结合,可通过截断与截短的方式研究结合的序列信息,为客户提供深度分析和研究方案

2.设置完整组别,包括Input组,正义链组,反义链组,阴性组,实验更加严谨可靠

3.提供可直接用于文章的标准结果图,以及实验原图结果

4.提供完善的实验报告,更利于文章的撰写和申请

适用研究:

各种通路,代谢路径,分子机制,细胞调控,药物诱导等方向的调控研究,寻找或验证RNA结合的蛋白,如:结合蛋白为某些转录因子,代谢过程中的核心酶,通路中的调控蛋白等

客户提供:

1.基因信息及转录本信息(或含目的基因的载体)

2.活细胞:3-4*10^7

3.新鲜组织:组织量>0.3-0.5g

4.产物WB检测的抗体(>5-10ug)

辉园苑提供:

1.体外转录检测图,产物银染胶图

2.完整实验报告

3.可直接用于文章使用的处理结果图

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