miRNA/LncRNA/circRNA抑制载体构建
2019.08.27
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       RNA干扰(RNAi)是一种RNA介导的基因沉默机制。在哺乳动物细胞中,可通过转入能与目的基因配对的双链RNA来实现,如siRNA、短发夹RNA(shRNA)。目前,主流的方法是将shRNA构建于载体中,利用细胞内的Dicer酶生成相应的siRNA,发挥RNAi的作用。一方面,shRNA慢病毒载体比体外合成的siRNA更为稳定,另一方面,经过慢病毒包装系统包装后,可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞系如原代细胞、悬浮细胞和处于非分裂状态的细胞,并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组,进行长时间的稳定表达。


原理:

       我们的RNAi抑制载体构建基于慢病毒表达系统,一般采用U6启动子驱动的pLKOG载体。

 

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技术路线:

1.shRNA靶点设计。

2.慢病毒载体插入靶点基因。

3.转化培养。

4.克隆筛选及鉴定。

5.无内毒素质粒提取。    


客户需提供:

1.miRNA、LncRNA、circRNA信息。如:已知NCBI编号,基因序列。


我们的服务:

1.靶点基因片段合成。

2.载体设计。

3.抑制构建及鉴定报告。

4.出货质粒,甘油菌。

5.载体更换。

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pLKOG抑制载体图谱



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