qPCR
2019.08.27
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          荧光定量PCR(realtime PCR)检测,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行相对定量分析的方法。荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied Biosystems公司推出,由于该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃,而且与常规PCR相比,它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点,到21世纪初已得到广泛应用。

RT-qPCR包括三部分:

1、依靠逆转录酶将RNA转变成cDNA;

2、用PCR扩增cDNA;

3、实时监测和定量测定cDNA的量。

原理:

       RT-qPCR在单管PCR的扩增和测定过程结合使用荧光指示染料。含量的测定依赖于测定增加的荧光信号,其强度与每一次PCR循环的产物量成正比。此外,在单次反应中,用不同染料标记的探针能够监测和定量多标记的目的基因。在一次循环中,单次PCR荧光第一次超过既定的或背景荧光阈值,这个参数就是称为循环阈值(Ct)或交叉点(Cp)。其实浓度越高,Ct值越小。当维持PCR分析滴定终点敏感性和特异性时,这种荧光强度和扩增的相关性使目的基因能够在一个较大的范围内被精确定量。



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qPCR扩增曲线图

技术路线:

1. 引物设计。

2. RNA提取及验证。

3. RT-PCR。

4. qPCR实验及跑胶验证。

5. 数据统计分析。


客户需提供:

1. 靶基因信息。如:已知NCBI编号,基因名称。

2. 细胞、组织、血液等待检测样本。


我们的服务:

1. 引物设计及合成服务。

2. RNA提取及验证服务。

3. RT-qPCR实验数据分析报告。

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