稳定细胞株构建
2019.10.15
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1.原理:

       将外源DNA克隆到具有某种抗性的载体上,载体通过慢病毒包装被感染到宿主细胞并整合到宿主染色体中,用载体中所含抗性基因进行筛选。得到可稳定表达目的蛋白,或者稳定表达沉默特定基因的细胞株。

       shRNA细胞株构建原理:短发卡RNA(shRNA)是可以克隆到表达载体并表达短的干扰RNA(sIrna,19-21个核苷酸的RNA双链)的DNA分子。我们可根据靶标设计短发卡RNA(shRNA)序列并将其克隆岛特定载体上。短发夹RNA是设计为能够形成发夹结构的非编码小RNA分子,可通过RNA干扰来抑制基因的表达。

过表达细胞株构建原理:通过人工构建的方式在目的基因上游加入调控元件,使基因可以在人为控制的条件下实现大量转录和翻译,从而实现基因产物的过表达。

       KO细胞株构建原理:基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术,是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA同源重组原理,用设计的同源片段替代靶基因片段,从而达到基因敲除的目的。随着基因敲除技术的发展,除了同源重组外,新的原理和技术也逐渐被应用,比较成功的有基因的插入突变和iRNA,它们同样可以达到基因敲除的目的。

2.技术应用

        需要长期观察外源基因表达的作用,进行长期药理学研究、基因治疗研究、遗传调控机制研究或需要进行大规模蛋白合成则需要构建稳转株。

3.实验流程:


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4.结果展示:



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DU145细胞荧光图                            SW480细胞荧光图



客户提供:细胞株(冻存管/培养细胞),目的基因的质粒/菌株,目的蛋白抗体,目的基因的载体信息、细胞培养信息

HYY提供:细胞株两管冻存管或一瓶复苏细胞,细胞株构建报告,QPCR鉴定报告,WB鉴定报告 

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