流式细胞凋亡
2019.08.15
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1、实验原理(细胞凋亡检测的方法很多,我们采用的哪种?Annexin V/PI双染法吗)

     细胞凋亡(Cell apoptosis)是指为维持内环境稳定,由基因控制的细胞自主的有序的死亡,亦称为程序性细胞死亡。细胞凋亡与细胞坏死不同,细胞凋亡不是一件被动的过程,而是主动过程,它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用,它并不是病理条件下的损伤,而是为更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程。

     Annexin V(或 Annexin A5)为胞内蛋白膜联蛋白家族成员,以钙依赖的方式与磷脂酰丝氨酸(PS)结合。PS存在于正常细胞浆膜的内层,但在凋亡早期,膜不对称性丧失,PS 易位至细胞表面。荧光标记的 Annexin V可与之特异性结合,表明该细胞为凋亡细胞。


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机械损伤(Q1):细胞膜破损严重,Annexin V-APC染不上。

晚期凋亡(Q2):细胞膜已经受损,7-AAD(ECD-A)与Annexin V-APC染料可以进入细胞内与DNA结合,不可逆转。

早期凋亡(Q3):细胞只有磷脂酰丝氨酸PS外翻,细胞膜完整,对7-AAD(ECD-A)拒染,可逆转

活细胞(Q4):对Annexin V-APC和7-AAD(ECD-A)都拒染


2、技术应用

     检测药物、基因或蛋白等对细胞凋亡的影响。

3、实验步骤

     1.细胞培养及种板;2.收集细胞及计数;3.孵育染料;4.流式细胞仪检测;5. Flowjo分析结果

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4、实验步骤

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客户提供:细胞株(冻存株或培养细胞)及处理用的药物,细胞培养基信息,细胞特殊处理方式

HYY提供:原始图片、流式原始数据,完整实验报告




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