双荧光素酶报告基因检测
2019.08.15
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1、实验原理

     荧光素酶(luciferase)是自然界中能够产生生物荧光的酶的总称,其中最有代表性的是从甲虫中分离得到的萤火虫荧光素酶(Firefly luciferase)和从海肾中分离得到的海肾荧光素酶(Renilla luciferase)。由于两种酶底物和发光颜色的区别,且在动物体内无内源性表达,使其在双报告实验中得到广泛应用。

萤火虫荧光素酶在氧气、ATP和镁离子同时存在的条件下,催化荧光素氧化,生成氧化荧光素,同时产生黄绿色光,波长540-600nm,一般检测时选用560nm。


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      海肾荧光素酶只需要氧气就可以催化腔肠素氧化产生蓝光,波长460-540nm,一般检测时选用460nm。

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不同于绿色荧光蛋白(GFP)需要一定的光激发才能发光,且易淬灭;荧光素酶经过反应本身就可以自发荧光,并且只有在底物存在时才能发光。因此GFP只能用于标记或检测反应是否发生,而荧光素酶报告实验却能通过荧光值定量分析荧光素酶的表达水平。

2、技术应用

      miRNA靶基因研究,转录因子研究,启动子分析;

3、实验步骤

     1.细胞铺板;2.质粒共转染;3.细胞酶产物裂解;4荧光检测;5.结果分析 


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4、结果展示

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客户提供:细胞株(冻存株或培养细胞)及处理用的药物,细胞培养基信息,细胞特殊处理方式

HYY提供:原始图片、原始数据,完整实验报告

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